無菌檢測法-微生物限度

無菌檢測法：用于檢查藥典要求無菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器械、原料、輔料、及其他品種是否無菌的一種方法。

無菌檢查的目的：

A 將供試品或其浸提液接種于培養(yǎng)基內(nèi)，以檢驗供試品是否有微生物污染。（比較小的樣品直接接種，大的浸提液）

B 無菌檢查法分為直接接種法和薄膜過濾法

無菌檢查的步驟：

環(huán)境及人員要求：

無菌檢查應(yīng)在無菌條件下進行，試驗環(huán)境必須達到無菌檢驗的要求，單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標準進行潔凈度確認。日常檢驗還需對試驗環(huán)境進行監(jiān)控。

9203藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則-2020年版《中國藥典》

微生物實驗的各項工作應(yīng)在專屬的區(qū)域進行，以降低交叉污染、假陽性結(jié)果和假陰性結(jié)果出現(xiàn)的風(fēng)險。無菌檢查應(yīng)在隔離器系統(tǒng)或B級背景下的*單向流潔凈區(qū)域中進行，微生物限度檢查應(yīng)在不低于D級背景下的生物安全柜或B級潔凈區(qū)域內(nèi)進行。*和B級區(qū)域的空氣供給應(yīng)通過終端高效空氣過濾器(HEPA)

9205 藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則-2020年版《中國藥典》

按空氣懸浮粒子大小的數(shù)量和不同參考現(xiàn)行“藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范”分為A、B、C、D 4個級別。

實驗人員上崗前應(yīng)依據(jù)所在崗位和職責(zé)接受相應(yīng)的培訓(xùn)，在確認他們可以承擔(dān)某一試驗前，他們不能獨立從事該項微生物試驗。培訓(xùn)內(nèi)容包括勝任工作所必需的設(shè)備操作、微生物檢驗技術(shù)等方面的培訓(xùn)，如無菌操作、培養(yǎng)基制備、消毒、滅菌、注平板、菌落計數(shù)、菌種的轉(zhuǎn)種、傳代和保藏、潔凈區(qū)域的微生物檢測、微生物檢查方法和鑒定基本技術(shù)等，經(jīng)考核合格后方可上崗。

實驗人員應(yīng)經(jīng)過實驗室生物安全方面的培訓(xùn)，熟悉生物安全操作知識和消毒滅 菌知識，保證自身安全，防止微生物在實驗室內(nèi)部污染（陽性培養(yǎng)物滅菌處理）。實驗室應(yīng)確定實驗人員持續(xù)培訓(xùn)的需求，制定繼續(xù)教育計劃，保證知識與技能不斷的更新。

所需設(shè)備：

培養(yǎng)基適用性檢查

硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（FTM）：主要用于厭氧菌的培養(yǎng)，也可用于需氧菌的培養(yǎng)；

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）：用于真菌和需氧菌的培養(yǎng)。

配制：可按藥典中的處方制備培養(yǎng)基，亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基或商品化的預(yù)制培養(yǎng)基

• 制備好的培養(yǎng)基若不即時使用，應(yīng)置于無菌密閉容器中，在2℃~25℃、避光的環(huán)境下保存，并在經(jīng)驗證的保存內(nèi)使用。

無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。

無菌性檢查

每批培養(yǎng)基隨機不少于5支（瓶），置各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天，應(yīng)無菌生長。

進行產(chǎn)品無菌檢查時，應(yīng)進行方法適用性試驗，以確認所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無菌檢查。若檢驗程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗結(jié)果時，應(yīng)重新進行方法適用性試驗。可與供試品的無菌檢查同時進行。

方法適用性試驗按“供試品的無菌檢查”的規(guī)定及下列要求進行操作。對每一試驗菌應(yīng)逐一進行方法確認。

無菌檢查法包括薄膜過濾法和直接接種法。